Detección de Entamoeba Hystolytica mediante Transferencia Sourthern blotting.

Se usa 15 μg de ADN genómico. Se detecta a partir de cultivos de control; de trofozoítos de HM-1:MSS, trofozoítos silenciados, sin plásmidos y clonados.

1.- Se somete a enzimas de restricción el ADN:  se establece que las enzimas son Bam HI, Eco RI, Hin dIII y Pst I.

2.-Se separan en gel el ADN: de gel de agarosa al 0,8%.

3.- Se desnaturaliza el ADN: en gel de álcali.

4.-Transferencia del ADN: a membranas de nailon cargadas positivamente.

5.- Se hibrida con variedad de sondas.

Resultados: Se determina que hay fragmento de 4.095 pb del genoma de la ameba, en Hin dlll en la posición de 158 de la secuencia de ADNc.

Referencias:

1) Rivka B, Yael N, Mirleman D. Transcriptional Silencing of an Amoebapore Gene in Entamoeba histolytica: Molecular Analysis and Effect on Pathogenicity. JMBE. 2020, Dic, 18. Disponible en: https://journals.asm.org/doi/full/10.1128/EC.2.2.295-305.2003

2)  Dey I, Keller K, Belley A, Chadee K. Identificación y caracterización de una enzima similar a la ciclooxigenasa de Entamoeba histolytica. Proc Natl Acad Sci US A. 11 de noviembre de 2003; 100 (23): 13561-6. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC263853/.