Se usa 15 μg de ADN genómico. Se detecta a partir de cultivos de control; de trofozoítos de HM-1:MSS, trofozoítos silenciados, sin plásmidos y clonados.
1.- Se somete a enzimas de restricción el ADN: se establece que las enzimas son Bam HI, Eco RI, Hin dIII y Pst I.
2.-Se separan en gel el ADN: de gel de agarosa al 0,8%.
3.- Se desnaturaliza el ADN: en gel de álcali.
4.-Transferencia del ADN: a membranas de nailon cargadas positivamente.
5.- Se hibrida con variedad de sondas.
Resultados: Se determina que hay fragmento de 4.095 pb del genoma de la ameba, en Hin dlll en la posición de 158 de la secuencia de ADNc.
Referencias:
1) Rivka B, Yael N, Mirleman D. Transcriptional Silencing of an Amoebapore Gene in Entamoeba histolytica: Molecular Analysis and Effect on Pathogenicity. JMBE. 2020, Dic, 18. Disponible en: https://journals.asm.org/doi/full/10.1128/EC.2.2.295-305.2003
2) Dey I, Keller K, Belley A, Chadee K. Identificación y caracterización de una enzima similar a la ciclooxigenasa de Entamoeba histolytica. Proc Natl Acad Sci US A. 11 de noviembre de 2003; 100 (23): 13561-6. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC263853/.
