Detección de Entamoeba Hystolytica mediante Transferencia Sourthern blotting.

Se usa 15 μg de ADN genómico. Se detecta a partir de cultivos de control; de trofozoítos de HM-1:MSS, trofozoítos silenciados, sin plásmidos y clonados.

1.- Se somete a enzimas de restricción el ADN:  se establece que las enzimas son Bam HI, Eco RI, Hin dIII y Pst I.

2.-Se separan en gel el ADN: de gel de agarosa al 0,8%.

3.- Se desnaturaliza el ADN: en gel de álcali.

4.-Transferencia del ADN: a membranas de nailon cargadas positivamente.

5.- Se hibrida con variedad de sondas.

Resultados: Se determina que hay fragmento de 4.095 pb del genoma de la ameba, en Hin dlll en la posición de 158 de la secuencia de ADNc.

Referencias:

1) Rivka B, Yael N, Mirleman D. Transcriptional Silencing of an Amoebapore Gene in Entamoeba histolytica: Molecular Analysis and Effect on Pathogenicity. JMBE. 2020, Dic, 18. Disponible en: https://journals.asm.org/doi/full/10.1128/EC.2.2.295-305.2003

2)  Dey I, Keller K, Belley A, Chadee K. Identificación y caracterización de una enzima similar a la ciclooxigenasa de Entamoeba histolytica. Proc Natl Acad Sci US A. 11 de noviembre de 2003; 100 (23): 13561-6. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC263853/.

 

Detección de entamoeba histolytica con PCR .

Se realiza primeramente el examen  de coproparasitario, en el cual gracias a esta prueba podemos determinar la presencia de  quistes o trofozoítos, cabe recalcar que el examen de PCR se establece para aclarar el diagnostico debido que se pueden confundir los resultados con la entamoeba dispar que es no patógena.

Posterior a los pasos mencionados en la infografía, se determina que en  la imagen de la electroforesis  se establece el fragmento 268pb indicando la presencia de la entamoeba histolytica.

 

 Referencias :

1.- López-López P, Mártinez-López M, Boldo-León X, et al. Detection and differentiation of Entamoeba histolytica and Entamoeba dispar in clinical samples through PCR-denaturing gradient gel electrophoresis. Brazilian journal of medical and biological research. 2017, Abril, 03; 50 (4). Disponible en:  https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5423754/

EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS.

 

Dichas pruebas nos permiten conclusiones precisas acerca de patologías tanto como mutaciones genómicas, metabólicas , síndromes etc... Es por ello que se debe establecer la muestra y posteriormente proseguir con los pasos correspondiente. Dando como resultado un aislamiento de sustancias y elementos que nos permitirán su correcto análisis.

Referencias :

1.- Paul R, Ostermann E, Wei Q. Advances in point-of-care nucleic acid extraction technologies for rapid diagnosis of human and plant diseases. Biosens Bioelectron [Internet]. 2020. [citado 15 dic 2021];169:112592. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7476893/

Normas de bioseguridad para los laboratorio de Biología Celular y Molecular.

 

La siguiente infografía nos permite entender los parámetros correspondientes para que se presente un adecuado manejo dentro del laboratorio.

Referencia:

1- Luis Haro. Biología Molecular CEGEMED.(video) Ecuador: (2018). Disponible en: https://www.youtube.com/watch?v=-gZGxAmt110&t=1s.

2- Ilapa-Rodríguez EO, Gomes-da Silva G, Lopes-Neto D, de Aguiar-Campos MP, Tavares-de Mattos MC, Miyar-Otero L. Medidas para la adhesión a las recomendaciones de bioseguridad para el equipo de enfermería. Enferm. glob. [Internet]. 2018 [citado 2019 Abr 06]; 17(49): 36-67. Disponible en: http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1695-61412018000100036&lng=es.

3-Rodríguez Sordía Doraida S.. Desechos hospitalarios: aspectos metodológicos de su manejo. Rev Cubana Hig Epidemiol [Internet]. 2000 Ago [citado 2021 Dic 06] ; 38( 2 ): 122-126. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1561-30032000000200006&lng=es.

4- Abarca Fernández Denices, Gutierrez Adriazola Sandra, Escobar Mamani Fortunato, Huata Panca Percy. Manejo de residuos sanitarios: un programa educativo del conocimiento a la práctica. Rev. investig. Altoandin.  [Internet]. 2018  Ago [citado  2021  Dic  08] ;  20( 3 ): 315-324. Disponible en: http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2313-29572018000300005&lng=es.  

Bienvenidos a mi blog de Biología celular y Molecular.

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En las siguientes entradas iremos publicando temas de interés público y académico sobre la biología celular  y molecular, cuyo objetivo es que mediante el análisis de información se les permita a los lectores adquirir mayor conocimiento sobre asuntos de su interés. Esta información se refutará y será contrastada mediante la  indagación de fuentes confiables y libros, teniendo en cuenta siempre que la información de los diferentes temas está en constante cambio y actualización.

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